GMP在線監(jiān)測系統(tǒng)AB級潔凈區(qū)的動態(tài)監(jiān)測    上海

1、實施動態(tài)監(jiān)測的意義和作用
在A/B 級潔凈區(qū)中，實施動態(tài)監(jiān)測是為人員行為評價、zui終產品放行必要的依據，以便及時發(fā)現其中存在的問題，并及時采取有效的措施解決問題，以防影響進一步擴大，同時，也為空氣平衡、人員行為和房間消毒方法的進一步改進了依據。另外，以此來判定潔凈室是否達到了規(guī)定的潔凈度，持續(xù)、穩(wěn)定地為生產保障，是評估生產環(huán)境控制的有效工具，是無菌藥品放行的要條件。
2、動態(tài)監(jiān)控項目和標準
2.1 監(jiān)測的項目
在生產操作前，要檢查、控制好區(qū)域內的溫度、濕度和壓差；在生產過程中，要監(jiān)測沉降菌、浮游菌、懸浮粒子和風速等情況；在關鍵操作完成后，要監(jiān)測設施、設備的表面和人員衛(wèi)生狀況。同時，在生產開始前后，都要檢測隔離操作手套。
2.2 溫度、濕度監(jiān)測
例如，中溫型微生物在25～30 ℃生長zui適宜；濕生型微生物在濕度為70%～90%的環(huán)境下生長、繁殖比較旺盛，因此，一般需要避開此溫度、濕度范圍。同時，溫度、濕度過高或過低，對人體的舒適度、人員的工作情緒等都有很大的影響，進而還會嚴重影響A/B級區(qū)人員的操作行為，無法有效保證產品的安全性。一般情況下，無菌制劑生存環(huán)境的溫度應控制在18～24 ℃、濕度應控制在45%～65%。
2.3 相對壓差監(jiān)測
不同潔凈度等級的潔凈區(qū)之間和潔凈區(qū)與非潔凈區(qū)之間的空氣靜壓差應大于10Pa，應裝有指示壓差的裝置；容易產生粉塵的生產區(qū)域應與相鄰的室（區(qū)）保持相對負壓；相同潔凈度的不同功能區(qū)（操作間）之間，應保持適當的壓差梯度。目前，常用的壓差表量程在0～60Pa之間，負壓的壓差表量程一般選擇在－30～30Pa之間，所以，在日常生產過程中，應對儀器、儀表本身的校驗或校正情況加強監(jiān)督和管理，因為壓差可以增加異常報警的情況。但是，為了避免正常操作（比如開門）造成的報警，可以適當增加報警延時裝置，具體的延時時間可以根據不同人員的開門、進入或物料轉運、關門所需時間驗證得出。
2.4 粒子和微生物監(jiān)測
潔凈區(qū)的設計必須符合相應的潔凈度要求，達到“靜態(tài)”和“動態(tài)”的標準，同時，該區(qū)還應當動態(tài)監(jiān)測微生物（浮游菌、沉降菌、表面微生物）的情況。微生物主要包括病毒、立克次體、細菌、菌類和原生蟲類等，與潔凈室有關的主要是細菌和菌類。細菌不能單獨生存，因此可以通過空調的初效、中效、（亞）過濾阻隔塵埃粒子，同時，也能完成對細菌的阻隔。對無菌區(qū)來說，微生物檢測更重要，但是直接檢測的周期長。所以，可以用粒子水平來間接衡量其具體的情況。這兩方面的檢測可以為無菌生產過程環(huán)境的破壞度和衛(wèi)生狀況作評估，為zui終產品的放行數據支持。
3、動態(tài)監(jiān)測的方法和注意點
3.1 懸浮粒子
目前，懸浮粒子的測定方法主要有顯微鏡法和自動粒子計數法兩種，而用于潔凈區(qū)空氣懸浮粒子監(jiān)測的儀器多為光散射粒子計數器和激光粒子計數器。綜合實際情況，建議在*區(qū)內采用連續(xù)監(jiān)測系統(tǒng)檢測空氣懸浮粒子。在線監(jiān)測系統(tǒng)可以實時反饋監(jiān)測信息，以便監(jiān)控人員及時提出解決其中存在問題的方法。比如，提醒操作人員減緩動作幅度，為環(huán)境清潔、消毒、停機等待等生產過程控制依據。與此同時，還要為空調過濾器的日常檢查、維護建立一套完善的操作、檢測、更換程序。只有這樣做，才能有效地控制其中存在的風險。
3.2 浮游菌
經常使用撞擊法中的狹縫式采樣器監(jiān)測浮游菌采樣器，通過多孔蓋抽取空氣，而氣流中的微生物則撞擊附著在標準培養(yǎng)皿中瓊脂培養(yǎng)基的表面。通常情況下，在測定浮游菌時，每個采樣點的取樣量不得少于1m3，而在生產過程中，可以設定采樣器，利用采樣、等待、再采樣的間隙方式監(jiān)測生產全過程。另外，浮游菌采樣器還有篩孔撞擊式、表面真空取樣、離心式、過濾式和液體沖擊式等采樣方式。
3.3 沉降菌
沉降菌是用暴露法收集降落在培養(yǎng)皿中的活生物性粒子，并將其培養(yǎng)、繁殖后加以計數所得。沉降菌測定的培養(yǎng)皿應布置在有代表性的地方和氣流擾動zui小的地方。具體的采樣方法和培養(yǎng)方法是，將培養(yǎng)皿放置在接近于操作高度的位置后，打開外蓋并倒扣放置，使培養(yǎng)基表面暴露出來。在靜態(tài)監(jiān)測時，培養(yǎng)皿應放置不少于30min后再將外蓋蓋上收集；在動態(tài)監(jiān)測時，暴露時間應根據沉降碟本身和環(huán)境兩方面因素驗證所得，單個沉降碟的暴露時間可以少于4h，但是不得過4h。在同一位置，可以使用多個沉降碟連續(xù)監(jiān)測并累積計數，然后收集，酵母菌和霉菌通常在20～25 ℃的條件下培養(yǎng)5～7d后計數，而需氧菌通常在30～35 ℃的條件下培養(yǎng)48～72h后計數。
沉降碟以其價廉、輕便、對空氣環(huán)境破壞較小等優(yōu)點被廣泛應用于潔凈區(qū)環(huán)境檢測中。但是，在使用沉降碟時，應先確認沉降碟的暴露時間（記下平皿打開和結束的時間），以保證暴露后的培養(yǎng)基不會因失水等原因而影響微生物的正常生長。目前，好多的培養(yǎng)皿是本廠自配的，密封性沒有購買的培養(yǎng)皿強，在生產過程中，轉運會對培養(yǎng)皿本身造成污染，使所得的結果出現假陽性。所以，建議在生產過程中，應使用培養(yǎng)皿本身的空白對照或購買密封性好的培養(yǎng)皿，以提高檢測結果的可信度。
3.4 物體表面微生物測試
物體表面微生物測試可以確定物體（包括工作服）表面微生物的污染程度。一般情況下，可以使用棉簽間接取樣后培養(yǎng)、直接接觸法取樣和表面沖洗法3種方法，而利用直接接觸法時，所用的接觸碟要放置至室溫后使用。
3.4.1 棉簽擦拭表面取樣方法
棉簽擦拭表面取樣方法的取樣面積一般為25cm2，人體表面擦拭至少應包括雙手手指印、頭、口罩、肩部、前臂、手腕和腿等。棉簽間接取樣適用于不規(guī)則表面，取樣時，手握住拭子柄，以30°角與取樣表面接觸，采用S型或型緩慢并旋轉棉簽充分擦拭。如果拭子頭為藻酸鈣材料，則要用稀鹽酸溶液作為稀釋劑（比如質量分數為1%的檸檬酸鈉溶液），這樣才能讓拭子頭溶解。
3.4.2 直接接觸法
直接接觸法是將接觸碟直接接觸需采樣的物體表面，接觸時間一般在10s左右，培養(yǎng)后便會長出菌落。因為該方法容易操作而且可以定量，所以被廣泛使用。但是，這個測試只適用于平整光滑的表面，通常在灌封或灌裝后清場前取樣。取樣后，需用蘸有質量分數為75%的乙醇的紗布擦拭被取樣表面，以除去殘留。將取樣后并做好標記的接觸碟置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)箱的參數一般設定在30～35 ℃，培養(yǎng)72h后計數。
3.4.3 表面沖洗法
表面沖洗法適用于監(jiān)測大面積區(qū)域內表面的微生物含菌量，包括設備軌道、儲水罐等。用定量的無菌水沖洗表面，收集淋洗水，用膜過濾法計算微生物的數量。
3.5 風速測試
檢測生產過程中*區(qū)的風速，使生產環(huán)境的風速符合指導值（0.36～0.54 m/s），同時，還可以判斷層流是否開啟、是否正常運行、是否被堵或泄漏，使生產環(huán)境達到要求。目前，由于安裝的隔離器密閉性良好，所以，經過相應的驗證，也可以適當地降低層流風速。部分文獻指出，*區(qū)可以選擇正壓無菌紊流的流型，不一定都要選擇層流流型。
3.6 隔離操作器手套的檢測
目前，檢測手套時一般采用完整性檢測，對其內部施加一定的壓力，在規(guī)定時間內，壓力降低值在可接受范圍內即視為合格。另外，還可以在每個班次生產前后，增加手套目檢程序等。檢測周期要根據產品的特點、設備和班次安排等因素驗證得出。
4、日常監(jiān)控取樣點和取樣頻次
zui關鍵點的位置作為取樣點并不一定適用，所以，必須考慮環(huán)境監(jiān)測會不會加大產品污染風險的概率。比如懸浮粒子的取樣點，一般布置在距離地面0.8～1.5m的位置，盡量避免在回風口附近取樣，而且測試人員應站在取樣口的下風側等。潔凈區(qū)監(jiān)測中的取樣點和取樣量可以比潔凈區(qū)確認時的取樣點和取樣量少，通過驗證確定取樣點，且其要通過風險分析和監(jiān)測結果分析（至少要有6個月以上的運行數據作為分析的基礎）。監(jiān)測頻次問題也是一個值得深思的課題，監(jiān)測頻次不夠，就不能很好地反映其中存在的問題——監(jiān)測頻次過多，不利于資源優(yōu)化。因此，監(jiān)測頻次的確定一般使用風險數值分布（RNR），即風險發(fā)生的嚴重性（SEV）與風險發(fā)生的可能性（OCC）的乘積。根據風險數值的大小確定不同的監(jiān)測頻率，同時，也要建立切實可行的措施降低其中的風險。
5、一般標處理方法和報告打印
在日常監(jiān)測過程中，如果監(jiān)測數據出現偏差時，其數據就會高于設定的限度，所以，必須通過CAPA（預防和糾正措施）調查發(fā)生了什么，如何防止該問題再次發(fā)生，而偏差及其后續(xù)措施都必須有相應的記錄。所以，要從人、機、料、法、環(huán)、測六個方面分析問題，運用風險評估工具排查風險點，找出要因，制訂切實可行的措施來解決問題，同時，還可以做必要的培訓、考核和評估工作，以便從根本上解決問題。在日常監(jiān)測過程中，每一批報告都要打印出，并附入相應批的生產記錄中。生產時間一般可以分為準備、自凈、生產和清場個階段，但是，報告打印的時間要包括環(huán)境的自凈時間和生產時間，并要備注解釋監(jiān)測常和標結果，從而保證產品生產情況的可追溯性。
6、結論
隨著藥品監(jiān)管力度的加大，市場要求的增強，藥品生產企業(yè)必需嚴控生產全過程，尤其是無菌藥品的生產全過程。自動化技術的應用，使藥品生產線無人化操作逐步成為可能；無菌隔離器的使用，讓關鍵工序無人操作成為了可能。但目前，隔離操作器的使用還存在一些缺陷，比如，在線監(jiān)測培養(yǎng)皿放入和取出的過程，手套在線更換執(zhí)行困難，系統(tǒng)存在泄漏時，應急處理措施缺失等。針對這些問題，需要進行更為系統(tǒng)的。同時，應用動態(tài)監(jiān)測系統(tǒng)可以實時數據、報警信息，方便及時控制生產過程，采取有效的手段解決生產過程中存在的問題。另外，應用在線監(jiān)測系統(tǒng)，可以減少對生產環(huán)境造成的污染，保證產品的質量。